
目前國內外最常見的蛋白質長效化技術是PEG(聚乙二醇)修飾。此外,還有基因點突變以增加糖基化位點、融合蛋白技術等。PEG是20世紀70年(nian)代(dai)後(hou)期(qi)發(fa)展(zhan)起(qi)來(lai)的(de)蛋(dan)白(bai)質(zhi)修(xiu)飾(shi)方(fang)法(fa),將(jiang)活(huo)化(hua)的(de)聚(ju)乙(yi)二(er)醇(chun)與(yu)蛋(dan)白(bai)質(zhi)分(fen)子(zi)相(xiang)偶(ou)聯(lian),增(zeng)加(jia)穩(wen)定(ding)性(xing),提(ti)高(gao)抵(di)抗(kang)蛋(dan)白(bai)酶(mei)水(shui)解(jie),延(yan)長(chang)體(ti)內(nei)半(ban)衰(shuai)期(qi)。該(gai)技(ji)術(shu)最(zui)大(da)的(de)缺(que)陷(xian)是(shi)PEG化會影響蛋白質的空間結構,導致目標蛋白活性顯著降低。該技術成功應用幾種蛋白質藥物(如幹擾素、粒細胞集落刺激因子等)的長效化,如美國先靈葆雅公司的佩樂能和羅氏公司的派羅欣。
對個別種類的蛋白質藥物(如EPO),采cai用yong增zeng加jia糖tang基ji化hua位wei點dian以yi增zeng加jia蛋dan白bai質zhi在zai體ti內nei的de穩wen定ding性xing,可ke延yan長chang半ban衰shuai期qi,但dan這zhe種zhong技ji術shu並bing不bu是shi一yi種zhong係xi統tong化hua平ping台tai化hua技ji術shu。同tong時shi,這zhe種zhong技ji術shu也ye會hui帶dai來lai不bu可ke預yu測ce的de不bu良liang反fan應ying。Amgen公司為應對第一代EPO專利到期被大量仿製的困境,對第一代EPO進行增加糖基化位點的突變,開發了第二代長效EPO(darbepoietin ,商品名Aranesep),多帶了兩個Nliantanglian,tineibanshuaiqiyanchang,kemeizhouyicigeiyao,danyinnengzengjiaaizhengheshenzangbingrenxinzangbingdefengxian,xuyaozaichanpinbaozhuangshangjiaheikuangjinggao。guoneiyeyouqiyecaiyongzhezhongfangfajinxingEPO的長效化改造,但未獲成功。
上個世紀九十年代,基於PEG化技術的缺陷,製藥企業在尋找新的蛋白質藥物長效化技術,如將治療性蛋白質與體內蛋白(如白蛋白、免疫球蛋白的Fc片段等)ronghe,biaodaderonghedanbaizaitineiwendingxingzengqiang,keyanchangbanshuaiqi,zaizhefangmianyouchenggongdeanli,danzhuyaoshishoutijiekangji,danweijianronghedanbaijuyoujidongjihuoxingdebaodao。yinaxipu(etanercept),又稱重組人II型腫瘤壞死因子受體-抗體融合蛋白,由人類75kD腫瘤壞死因子受體的胞外區和人類IgG1的Fc段連接而成,用於治療類風濕關節炎。這一技術方法獲FDA和市場的認可。
目標蛋白與免疫球蛋白的Fc片段相連進行融合表達,以發明新的、保留原有活性水平的長效蛋白質藥物,存在很大的技術瓶頸。首先,目標蛋白與體內蛋白質直接相連有優勢,如EPO與Fc片段直接連接,而不通過外來的短肽(Linker)連接,有利於避免外來短肽帶來的免疫原性風險,但直接連接可能會改變目標蛋白的結構,影響其活性;其次,Fc片段的N端(絞鏈區)有一個遊離的半胱氨酸,易與相連的目標蛋白(如EPO)C端上半胱氨酸形成二硫鍵,從而影響目標蛋白的空間結構,導致目標蛋白活性下降或免疫原性產生等。